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免疫膠體金的制備原理(下)

2025-12-04 16:06:48

當(dāng)?shù)鞍浊疤幚硗瓿珊螅缓笠_定膠體金與蛋白融合的絕佳pH值。對(duì)理化性質(zhì)模棱兩可的蛋白這一步至關(guān)重要。過量的蛋白與不同pH值的膠體金融合后,僅有某一特定pH值可以產(chǎn)生融合比較穩(wěn)的探針。在膠體金廠家濃度較高的電解質(zhì)溶液(如NaCl)作用下不容易凝聚。不一樣蛋白的適合pH范圍的寬度大不一樣。一般選擇適合pH值。但有些探針的具體情況并不完全這樣,穩(wěn)的探針并不完全意味著活力好,這靠的是實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

在確定好pH值后,然后要確定蛋白量,即可以產(chǎn)生平穩(wěn)探針的蛋白的極少量。若是在制取探針時(shí)加入太多蛋白,不但導(dǎo)致消耗,同時(shí)更為嚴(yán)重是指容易造成探針凝結(jié),并嚴(yán)重影響標(biāo)識(shí)活力。由于探針溶液中的分散蛋白容易提前與標(biāo)識(shí)結(jié)構(gòu)域融合,具有“封閉式”(Blocking)功效,而膠體金探針標(biāo)識(shí)不了。在標(biāo)識(shí)點(diǎn)位稀少、被標(biāo)記物成分較少的前提下要特別注意。

膠體金具有較高的動(dòng)力學(xué)模型可靠性,在穩(wěn)定要素不會(huì)受到毀壞時(shí)本身凝結(jié)極慢,可存放多年不會(huì)凝結(jié)。影響穩(wěn)定的要素主要包括:電解質(zhì)溶液、膠體溶液濃度、環(huán)境溫度、非電解質(zhì)等。膠體金廠家說膠體金溶液必須有少許電解質(zhì)溶液作增稠劑,但濃度值不能太高。濃度較高的吸水性非電解質(zhì)能剝掉顆粒外邊的凝固膜使之凝結(jié)。少量高分子物質(zhì)促進(jìn)膠體溶液凝結(jié),但一定量的高分子物質(zhì)可增加膠體溶液穩(wěn)定性,如蛋白質(zhì)、葡萄糖、PEG20000等添加有較好的穩(wěn)定效果。

當(dāng)膠體金溶液吸咐蛋白質(zhì)后,膠體溶液的穩(wěn)定隨溶液pH而變化,而這種變化又在于吸咐蛋白質(zhì)的等電點(diǎn),如ConA,過氧化酶等,當(dāng)pH較低時(shí)保持穩(wěn)定,提升pH則顯得不穩(wěn)定,貼近等電點(diǎn)或偏高時(shí)又變得穩(wěn)定了。標(biāo)識(shí)后膠體金水溶液可以用0.2~0.5mg/mlPEG20000做為增稠劑。在4~10℃存儲(chǔ)數(shù)月合理,不適合冷凍。存儲(chǔ)中可能發(fā)生程度不同的凝結(jié),可離心去除。

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