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免疫膠體金的制備原理(上)

2025-12-04 16:06:09

膠體金是氯金酸(HAuCl4)在氧化劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下,金正離子復原后匯聚而成一定大小的金顆粒物,它由一個基礎的能量源(11個金分子所形成的二十面體)和包圍著在外的雙正離子層組成(里層為空氣負離子層AuCl2,表層是帶正電的H)。因為靜電引力,金顆粒物中間相互排斥而飄浮成為一種相對穩定的膠體狀態,產生帶負電荷的疏水膠溶液,故名膠體金。膠體金廠家講述膠體金在堿性條件下帶負電,能與蛋白質分子的正電官能團產生穩固的融合,由于這種融合是靜電感應融合,所以不影響蛋白質的特性。除開與蛋白質融合之外,它還可以與很多其他分子融合,如SPA、PHA、ConA等。依據膠體金的一些物理性狀,如高電荷密度、顆粒物尺寸、樣子及顏色反應,再加上結合物的免疫和生長習性,因此使膠體金普遍地用于醫學免疫學、病理學、病理學和分子遺傳學等領域。

膠體金標識,實質上是蛋白質等高分子材料被吸咐到膠體金顆粒物表層的抱被過程。用以膠體金標識的蛋白一定要通過預處理,其目的是為了:(1)除去高濃度的鹽份,高濃度的鹽份通常影響蛋白與膠體金的吸咐融合,或造成膠體金顆粒的凝結,這一步通常選用較低濃度的緩沖溶液中進行。(2)使蛋白分子結構盡可能分散為單個,干凍蛋白或濃度較高的蛋白溶液中蛋白分子結構通常凝結為多聚體生物大分子,可同時與多個膠體金顆粒融合,影響標識的精確度和定量分析。(3)使蛋白具備適度的含量。蛋白含量太小(30kD),所形成的蛋白分子通常不穩,可短時間失去活性。而含量太大時,被認為影響探針的敏感度,尤其是已經知道蛋白的結構與活性中心的情形下,除去對活力影響的構造部分是提升標識敏感度,增加探針使用壽命(避免凝結)的有力方法。把含量太小的蛋白與其它蛋白(如血清蛋白等)融合后,膠體金廠家能配制出可靠性更好的探針。

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